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人脂肪干細(xì)胞永生化細(xì)胞專用培養(yǎng)基傳代

更新時間:2025-05-15   點擊次數(shù):129次

人脂肪干細(xì)胞永生化細(xì)胞專用培養(yǎng)基傳代 

1) 當(dāng)細(xì)胞匯合度達(dá)到 85%以上時,可進(jìn)行傳代。

2) 在生物安全柜內(nèi),打開培養(yǎng)瓶瓶口,收集瓶內(nèi)的培養(yǎng)基;

3) 向培養(yǎng)瓶內(nèi)加入 3ml 無菌的 1×PBS 后,水平放置培養(yǎng)瓶,使PBS 能夠浸潤到培養(yǎng)瓶底面上所有的面積,吸棄 PBS;

4) 向瓶內(nèi)加入消化液 1ml,浸潤底面后放入 37℃ CO2培養(yǎng)箱中孵育 1~2min;

5) 孵育完成后在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞是否變圓飄起,若全部消化下來則直接向培養(yǎng)瓶內(nèi)加入2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基中,將懸液吸入 15ml 離心管;

① 準(zhǔn)備一個無菌的 15ml 離心管,加入 2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基;

② 將消化下來的細(xì)胞吸入①中的離心管內(nèi)中和(避免吹打③);向之前消化的培養(yǎng)瓶中加入 1ml 繼續(xù)消化 2min 左右,輕拍培養(yǎng)瓶,95%左右細(xì)胞脫。

6) 1000rpm 離心 5min;

7) 準(zhǔn)備兩個新的 T-25 培養(yǎng)瓶,各加入 4ml培養(yǎng)基。

8) 離心完成后,棄上清,用 2ml 培養(yǎng)基重懸離心細(xì)胞,將重懸后的細(xì)胞轉(zhuǎn)入 2 個 T-25 培養(yǎng)瓶,每個培養(yǎng)瓶各 1ml;

9) 水平放置培養(yǎng)瓶,震蕩混勻后,將培養(yǎng)瓶置于 37℃,5%CO2培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。 


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